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谷胱甘肽的檢測方法

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  谷胱甘肽檢測方法較多,比較常用的有碘量法、DTNB(Ellman試劑)法、亞硝基鐵氰化鈉法、熒光法、四氧嘧啶法和高效液相色譜法( HPLC),上述方法各有優點,在檢測GSH含量時可根據實際情況,選擇適合、靈敏、精確的檢測方法。

  谷胱甘肽檢測方法較多,比較常用的有碘量法、DTNB(Ellman試劑)法、亞硝基鐵氰化 鈉法、熒光法、四氧嘧啶法和高效液相色譜法( HPLC),上述方法各有優點,在檢測GSH含量時可根據實際情況,選擇適合、靈敏、精確的檢測方法。

  DTNB比色法

  原理:DTNB與谷胱甘肽的巰基反應生成黃色的5 - 硫代 - 2 -硝 基苯甲酸,在412 nm波長處有最大吸收峰,而DTNB在400nm以上幾乎沒有吸收峰,向含有谷胱甘肽的試樣中加入少量的DTNB,將反應液在412 nm處測定吸收值,根據吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量。

  方法步驟:

  1、DTNB貯存液配制:將0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸緩沖液(pH7.0)中形成DTNB貯存液。

  2、DTNB分析液配制:將DTNB貯存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl緩沖液稀釋100倍,配成DTNB分析液,避光放置,現配現用。

  3、操作步驟:取谷胱甘肽標準品溶液或待測樣品溶液(0.1 ~ 3.0 mol/L)0.5 mL,加入到1.5 mL濃度為0.15 mol/L的NaOH溶液中,再加入3%的甲醛溶液05mL,在pH8.0、25℃下反應2 min,反應結束后。取反應液0.5 mL加入DTNB分析液,在25℃下反應5 min,于波長412 nm下測定吸收值,根據兩者的吸光度,計算差值,代入標準曲線,計算出谷胱甘肽的含量。


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